Lait 70 (1990) 313-324
DOI: 10.1051/lait:1990424

Biochemical aspects of a whey fraction capable of promoting hybridoma proliferation. Comparison with fetal calf serum

A.F. Derouiche^a, C. Legrand^a, J.M. Bour^a, J. Capiaumont^a, M.A. Gelot^a, B. Dousset^a, F. Belleville^a, P. Nabet^a and G. Linden<sup>b

a</sup>  Nancy University I, School of Medicine, Biochemistry Laboratory, BP 184, 54500 Vandoeuvre Cedex
^b  Nancy University, Faculty of Sciences, Applied Biochemistry, associated with INRA, BP 239, 54506 Vandoeuvre Cedex, France

(Received 26 February 1990; accepted 8 June 1990)

Abstract - Human and bovine milks were used as serum substituts for cell cultures. Two whey fractions termed LBS65 and LELm prepared by different steps were routinely used for culturing hybridomas in our laboratory. They stimulated ³H-thymidine incorporation into hybridoma, but a minimum of 1% of fetal calf serum (FCS) was required when the cells were propagated in the long-term. In this investigation, the chemical composition of LBS65 and LELm was studied in parallel to FCS composition. LBS65 and FCS had a total protein level of about 40 g / l, while LELm contained them at a concentration of 11 g / l. The amino acid content of FCS and LBS65 was very similar (about 4 000 μmol / l), whereas it was lower in LELm (about 300 μmol / l). Although the values of nitrogen com-pounds were different in LBS65 and LELm, these 2 whey fractions behaved similarly to a substitute of FCS. Whey fractions were low in sodium, and high in calcium compared to FCS. The cholesterol level was lower and triglycerides were higher in whey than in FCS. The ratio of unsaturated / saturated fatty acids varied from 1 whey fraction to another. It differed from the FCS ratio. FCS and whey fractions contained small amounts of steroid or peptide hormones. However, progesterone, 17-OH-progesterone, ACTH and cAMP concentrations were higher in the whey fraction than in FCS. Whey fractions are a complex medium containing various compounds able to promote cell growth. However, some unknown compounds present in FCS and absent in milk fractions are required in long-term cell culturing.

Résumé - Composants biochimiques du lactosérum pouvant induire la prolifération cellulaire d'hybridomes
Comparaison avec le sérum de veau foetal. Les laits humains ou bovins ont été utilisés comme substitut du sérum dans les cultures cellulaires. Deux fractions de lactosérum, appelées LBS65 et LELm, préparées de façon différente, sont couramment utilisées au Laboratoire pour la culture d'hybridomes. Ils stimulent l'incorporation de ³H-thymidine dans des hybridomes, mais si les cultures doivent être faites à long terme, 0,5 ou 1%de sérum de veau foetal (FCS) reste indispensable. Dans ce travail, est étudiée la composition chimique de LBS65 et LELm parallèlement à celle du sérum de veau foetal. LBS65 et FCS ont une concentration en protéines totales voisine (environ 40 g / l), alors que LELm n'en contient que 11 g / l. De même, les acides aminés sont au même taux (environ 4 000 μmol / l) dans FCS et LBS65 et à des taux faibles dans le LELm (environ 300 μmol / l). Bien que très différentes par leur contenu azoté, LBS65 et LELm se comportent sensiblement de la même façon comme substitut de FCS. Les lactosérums ont, par rapport au FCS, une teneur faible en sodium et élevée en calcium. Le taux de cholestérol est plus bas dans les lactosérums et les triglycérides sont plus élevés. Le rapport (acides gras (AG) insaturés / AG saturés) est très variable d'un lactosérum à l'autre et différent de celui du FCS. FCS et lactosérums contiennent des quantités faibles d'hormones stéroïdes ou peptidiques. Il faut cependant noter que les taux de progestérone, 17-OH-progestérone, ACTH et surtout AMPc sont supérieurs dans les lactosérums. Le lactosérum est donc un milieu complexe contenant de nombreux composés dont chacun peut avoir une activité de croissance. Cependant, certains facteurs encore inconnus, présents dans le FCS, qui sont nécessaires à la croissance à long terme des hybridomes, manquent dans les lactosérums.

Key words: bovine milk / whey / whey hormone / whey amino acid

Mots clés : lait bovin / lactosérum / hormone du lactosérum / acide aminé du lactosérum