Lait 68 (1988) 281-294
DOI: 10.1051/lait:1988318

Study of the early stages of tryptic hydrolysis of β-casein

Joëlle LEONIL, D. MOLLE and J.L. MAUBOIS

INRA, Laboratoire de Recherches de Technologie Laitière, 65, rue de Saint-Brieuc, 35042 Rennes Cedex, France

Abstract - The early stages of tryptic digestion of βA₂casein were investigated using reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The results obtained show that β-casein degradation included the following events: the fast appearance of two N-terminal peptides (1-25) and (1-28) fragments, the latter being an intermediate product, along with the gradual disappearance of the whole molecule. Splitting of these N-terminal peptides induces the formation of hydrophobic intermediates which may precipitate, depending on the initial β-casein concentration. Electrophoretic comparison of tryptic and plasmin digests of β-casein suggests that the precipitate contained mainly, large C-terminal fragments. Further hvdrolysis led to the formation of the other stable end-products. Among these, the first three to appear were (100-105), (170-176) and (177-183). The results of this study show that the regions (...25-29...) and (...105-108...) of the β-casein are particularly susceptible to the attack by the trypsin.

Résumé - Etude des premières étapes de l'hydrolyse trypsique de la caséine β
L'évolution de l'hydrolyse trypsique de la caséine βA₂ a été étudiée par chromatographie liquide haute performance (RP-HPLC colonne PEP-RPC). Dès le début de l'hydrolyse, nous avons mis en évidence l'apparition de 2 phosphopeptides : les fragments (1-25) et (1-28), ce dernier étant un peptide intermédiaire. La libération de ces fragments N-terminaux est associée à la formation de fragments très hydrophobes qui précipitent selon la concentration initiale en caséine β (supérieure à 1 g / 1). La comparaison electrophorétique du précipité avec les produits connus d'hydrolyse de la caséine β par la plasmine montre qu'il s'agirait principalement de gros fragments renfermant la séquence C-terminale de la caséine β. Ces fragments peuvent être facilement séparés par chromatographie sur un échangeur d'anions (Mono Q).
L'étude de la cinétique d'apparition des peptides finaux montre que les peptides (100-105), (170-176) et (177-183) sont produits postérieurement aux phosphopeptides (1-25) et (1-28) mais bien avant les autres peptides finaux.
Il ressort des résultats présentés que les régions (...25-29...) et (...105-108...) de la caséine β sont particulièrement sensibles à l'attaque par la trypsine.

Key words: β-casein / Tryptic hydrolysis / Plasmin / FPLC / Phosphopeptides -β-casein breakdown / Peptides (100-105) (170-176) (177-183)

Mots clés : Caséine β / Hydrolyse trypsique / Plasmine / FPLC / Phosphopeptides / Fragmentation de la caséine β / Peptides (100-105) (170-176) (177-183)