Influence de la phosphorylation sur le comportement des peptides trypsiques de caséine β bovine en chromatographie liquide haute performance en phase inverse

Abstract - Influence of phosphorylation on the behaviour of bovine β-casein tryptic peptides obtained by reverse phase high performance liquid chromatography
Using electrophoretic technics and phosphorus determinations, the total dephosphorylation of bovine β-casein has been performed by the action of potatoe acid phosphatase. The enzyme did not react with the substrate when it became insoluble. Moreover it has been observed that the commercial preparation used was contaminated with a serine proteinase. Tryptic hydrolysates of the native or totally dephosphorylated protein have been studied by reverse phase high performance liquid chromatography. Peptide mappings were similar except for phosphopeptides and their dephosphocounterparts. For these particular peptides, observed differences in retention time were between 0.4 and 0.9 min per phosphate group. Therefore the theory which predicts the retention time of a peptide from the sum of the contributions of each residue, terminal groups and lateral substitutions does not apply here.

Résumé - La déphosphorylation complète de la caséine B bovine, étudiée par électrophorèse et dosage du phosphore, a été réalisée par la phosphatase acide de pomme de terre. Cet enzyme ne réagissait pas avec le substrat quand ce dernier était précipité. Il a été montré par ailleurs que la préparation commerciale utilisée était contaminée par une protéase à sérine.
Les hydrolysats tryptiques obtenus à partir de la protéine native ou totalement déphosphorylée ont été fractionnés et comparés en chromatographie liquide haute performance en phase inverse (C18). Seuls les phosphopeptides et les peptides déphosphorylés homologues avaient des temps de rétention différents, mais les variations observées, de 0,4 à 1,9 min par groupement phosphate, dépendaient du peptide considéré. Ainsi, la théorie selon laquelle, dans des conditions d'élution bien définies, la rétention d'un peptide peut être considérée comme la somme arithmétique des contributions de chaque résidu, des groupements terminaux et des substitutions latérales, ne peut pas être appliquée dans ce cas précis.