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| Issue |
Lait
Volume 80, Number 5, September-October 2000
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|---|---|---|
| Page(s) | 517 - 526 | |
| DOI | https://doi.org/10.1051/lait:2000142 | |
DOI: 10.1051/lait:2000142
Plasmin digestion of bovine
Lait 80 (2000) 517-526
Plasmin digestion of bovine 
-casein dephosphorylated with one
protein phosphatase type 2A purified from Yarrowia lipolytica
Pascale Joliveta - Isabel Queiroz Macedob - Min Wua - Jean-Claude Meuniera
aLaboratoire de Chimie Biologique, INRA, INA PG, Centre de
Biotechnologies Agro-Industrielles, 78850 Thiverval-Grignon, France
bChemistry Department, University of Aveiro, 3810 Aveiro, Portugal
(
Abstract:
Bovine -casein was dephosphorylated by the catalytic sub-unit of a type 2A protein
phosphatase (PP2Ac) purified from the yeast Yarrowia lipolytica. Complete
dephosphorylation was obtained after 24 to 30 h in Tris buffer (pH 7.5). On
the contrary, the activity of PP2Ac was largely inhibited (80%) in the presence
of 13 mmol
L-1 sodium citrate (pH 6.8). After dephosphorylation of -casein,
plasminolysis was increased and more 3% TCA-soluble peptides were obtained
(30% increase). Dephosphorylation led to the disappearance of the f 29-105/107
peptide and to the appearance of a new non-phosphorylated 8 200 gmol-1 peptide,
suggested to be f 33-105/107 originated from the middle part of the -casein
sequence and obtained upon plasmin cleavage of the Lys32-Phe33 peptide bond.
-casein was dephosphorylated by the catalytic sub-unit of a type 2A protein
phosphatase (PP2Ac) purified from the yeast Yarrowia lipolytica. Complete
dephosphorylation was obtained after 24 to 30 h in Tris buffer (pH 7.5). On
the contrary, the activity of PP2Ac was largely inhibited (80%) in the presence
of 13 mmolL-1 sodium citrate (pH 6.8). After dephosphorylation of -casein,
plasminolysis was increased and more 3% TCA-soluble peptides were obtained
(30% increase). Dephosphorylation led to the disappearance of the f 29-105/107
peptide and to the appearance of a new non-phosphorylated 8 200 gmol-1 peptide,
suggested to be f 33-105/107 originated from the middle part of the -casein
sequence and obtained upon plasmin cleavage of the Lys32-Phe33 peptide bond.
Keywords:
-casein / dephosphorylation / protein phosphatase / Yarrowia lipolytica / plasmin
Résumé:
Hydrolyse par la plasmine de la caséine bovine déphosphorylée par une protéine
phosphatase de type 2A purifiée chez Yarrowia lipolytica. La caséine
peut être
déphosphorylée par la sous-unité catalytique d'une protéine phosphatase de type 2A
purifiée chez la levure Yarrowia lipolytica. La déphosphorylation complète est obtenue
en 24 à 30 h en tampon Tris (pH 7.5).
À l'inverse, elle est largement inhibée par le citrate
de sodium 13 mmolL-1 à pH 6.8 (80 % d'inhibition). Après déphosphorylation, la
plasminolyse de la caséine
est augmentée puisque l'on observe une production
supplémentaire de 30 % de peptides solubles dans le TCA à 3 %. La déphosphorylation se
traduit par la disparition du peptide f 29-105/107 et l'apparition d'un nouveau peptide
non phosphorylé de 8 200 gmol-1. Il pourrait s'agir du peptide f 33-105/107 provenant
de la partie centrale de la séquence protéique de la caséine
et obtenu par attaque de
la liaison peptidique Lys32-Phe33.
bovine déphosphorylée par une protéine
phosphatase de type 2A purifiée chez Yarrowia lipolytica. La caséine
peut être
déphosphorylée par la sous-unité catalytique d'une protéine phosphatase de type 2A
purifiée chez la levure Yarrowia lipolytica. La déphosphorylation complète est obtenue
en 24 à 30 h en tampon Tris (pH 7.5).
À l'inverse, elle est largement inhibée par le citrate
de sodium 13 mmolL-1 à pH 6.8 (80 % d'inhibition). Après déphosphorylation, la
plasminolyse de la caséine
est augmentée puisque l'on observe une production
supplémentaire de 30 % de peptides solubles dans le TCA à 3 %. La déphosphorylation se
traduit par la disparition du peptide f 29-105/107 et l'apparition d'un nouveau peptide
non phosphorylé de 8 200 gmol-1. Il pourrait s'agir du peptide f 33-105/107 provenant
de la partie centrale de la séquence protéique de la caséine
et obtenu par attaque de
la liaison peptidique Lys32-Phe33.
Mots clé :
caséine b / déphosphorylation / protéine phosphatase /
Yarrowia lipolytica / plasmine
Correspondence and reprints: Pascale Jolivet
tel. (33) 1 30 81 54 67; fax: (33) 1 30 81 53 73;
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