Propriétés des lacticodéshydrogénases de Streptococcus thermophilus indépendantes du fructose 1,6-diphosphate

Abstract - Properties of fructose 1,6-diphosphate independent -lactate dehybrogenases from steptococcus thermophilus
The properties of S. thermophilus LDH have been studied using soluble crude extracts of 10 strains and also partially purified extracts of 2 of them. The stability of LDH when refrigerated and frozen as well as its thermoresistance varied with the strains. Phosphate activated LDH but FDP did not; on the contrary FDP inhibited the LDH activity at concentration > 1 mM. Slight inhibition of LDH occurred with Mn^{+ +}. The ADP, ATP, 6-P-gluconate, oxamate and NAD were the strongest inhibitors of LDH activity measured with pyruvate as the substrate. Some of the inhibitions varied with the pH. The activity with L(+)-lactate as the substrate was 30 times lower than the reverse activity (reduction of pyruvate) and lactate concentrations above 200 mM were needed. An excess of NADH (0.2 mM with strain 302; 0.33 mM with strain 385) inhibited the LDH activity. Likewise, pyruvate (> 10 mM) was inhibitory but its effect was different according to the presence or absence of FDP (0.5 mM). The K_m and V_max constants were measured. The activity of LDH remained unchanged between pH 4.7 and 7.5. However this activity rapidly decreased at pH < 4.7, becoming almost nil at pH 4.6. The S. thermophilus LDH electrophoretic mobilities were compared to those of the well known isoenzymes of animal origin. Two types of LDH with different mobilities were found: the A type, soluble in 55 p. 100 ammonium sulphate solution, and the B type (the most active) insoluble at this concentration.
These results confirm the physiological, nutritional and metabolic particularities of S. thermophilus species and also the variations found among the strains within the species

Résumé - Ce travail était consacré aux propriétés des lacticodéshydrogénases (LDH) de Streptococcus thermophilus. Pour effectuer cette étude, des extraits bruts solubles de dix souches et des extraits partiellement purifiés de deux de ces dix souches ont été utilisés.
La stabilité au froid et à la congélation ainsi que la résistance thermique variaient selon les souches. Les LDH étaient activées par l'ion phosphate mais ne l'étaient pas par le FDP ; ce composé est inhibiteur à forte concentration (> 1 mM). L'ion Mn⁺⁺ inhibait légèrement les LDH. L'ADP, l'ATP, le 6-P-gluconate, l'oxamate et le NAD étaient les inhibiteurs les plus forts de l'activité LDH mesurée dans le sens de la réduction du pyruvate. Certaines de ces inhibitions variaient avec le pH. L'activité dans le sens de l'oxydation du L(+)-lactate était trente fois plus faible que l'activité de réduction du pyruvate et elle exigeait de très fortes concentrations en lactate (> 200 mM). Un excès de NADH (0,2 mM pour la souche 302, 0,33 mM pour la souche 385) inhibait l'activité LDH. Le pyruvate était également inhibiteur (> 10 mM) et son effet était différent selon que le FDP était présent (0,5 mM) ou non. Les K_m et les V_max ont été mesurées. L'activité LDH demeurait constante dans une large zone de pH (4,7 à 7,5). Toutefois, elle chutait très rapidement aux pH < 4,7, devenant quasi nulle à pH 4,6. Les mobilités électrophorétiques des LDH de S. thermophilus étaient comparées à celles, bien connues, des isoenzymes du muscle bovin. Deux LDH de mobilités électrophorétiques différentes étaient détectées : l'une de type A soluble à une concentration de 55 p. 100 de sulfate d'ammonium, l'autre de type B (la plus active), insoluble à cette concentration.
Ces résultats mettent à nouveau en évidence les particularités de l'espèce S. thermophilus du triple point de vue physiologique, nutritionnel et métabolique, ainsi que certaines variations entre souches