Lait 84 (2004) 77-85
DOI: 10.1051/lait:2003043

Characterisation of Streptococcus thermophilus CNRZ368 oxidative stress-resistant mutants: involvement of a potential Rgg-like transcriptional regulator

Annabelle Fernandez, Frédéric Borges, Annabelle Thibessard, Brigitte Gintz, Bernard Decaris and Nathalie Leblond-Bourget

Laboratoire de Génétique et Microbiologie, UMR INRA 1128, IFR 110, Faculté des Sciences et Techniques de l'Université Henri Poincaré, Nancy 1, BP239, 54506 Vandoeuvre-lès-Nancy, France
(Published online 12 December 2003)

Abstract
Eight mutants of Streptococcus thermophilus CNRZ368 presenting a menadione-resistant phenotype were selected and the locus mutated in each mutant was identified. Among these clones, 5 were disrupted in a gene of unknown function, 2 were impaired in genes involved in cellular metabolism and the last one (the mutant 15H7) was disrupted in rgg encoding a putative transcriptional regulator. To determine if rgg could be a key regulator of the superoxide defence of S. thermophilus, the 15H7 mutant was further characterised. The results from our work indicate that the rgg gene, mutated in the 15H7 genome, is a pseudogene composed of 2 ORFs (rggA and rggB) that are potentially translated in two different frames. Moreover, transcription analysis demonstrated the existence of a transcript containing rggA, rggB and orf2. Construction of rggA, rggB and orf2 mutants and their phenotypic analysis confirmed the involvement of rggA and rggB in the oxidative stress response. The question of the role of the pseudogene rgg is still open.

Résumé
Caractérisation de mutants résistants au stress oxydant chez Streptococcus thermophilus CNZR368 : implication d'un régulateur transcriptionnel putatif de type Rgg. Huit mutants de Streptococcus thermophilus CNRZ368, présentant un phénotype de résistance à la ménadione ont été sélectionnés et le locus muté a été identifié pour chacun d'eux. Parmi ces clones, 5 sont interrompus dans un gène de fonction inconnue, 2 sont mutés dans des gènes impliqués dans le métabolisme cellulaire et un autre (15H7) est interrompu dans le gène rgg codant potentiellement un régulateur transcriptionnel. Afin de déterminer si rgg est un régulateur majeur de la défense contre le stress superoxyde le mutant 15H7 a été plus amplement étudié. Les résultats de notre travail indiquent que le gène rgg, muté dans le génome de 15H7, est un pseudogène composé de deux ORF (rggA and rggB) potentiellement traduites dans deux phases de lecture différentes. De plus, l'analyse transcriptionelle démontre l'existence d'un transcrit englobant rggA, rggB et orf2. La construction des mutants rggA, rggB et orf2 ainsi que l'analyse de leur phénotype confirme l'implication de rggA et rggB dans la réponse contre le stress oxydant. La question concernant le rôle du pseudogène rgg est toujours ouverte.

Key words: Streptococcus thermophilus / oxidative stress / Rgg-like transcriptional regulator

Mots clés : Streptococcus thermophilus / stress oxydant / régulateur transcriptionnel de type Rgg

Correspondence and reprints: Nathalie Leblond-Bourget bourget@nancy.inra.fr

© INRA, EDP Sciences 2004