Lait 84 (2004) 69-76
DOI: 10.1051/lait:2003039

Identification of a new oxidative stress transcriptional regulator in Enterococcus faecalis

Nicolas Verneuil, Yoann Le Breton, Axel Hartke, Yanick Auffray and Jean-Christophe Giard

Laboratoire de Microbiologie de l'Environnement, EA 956, USC INRA, IRBA, Université de Caen, 14032 Caen Cedex, France
(Published online 12 December 2003)

Abstract
Enterococcus faecalis, sometimes used as lactic ferment, is able to resist many kinds of environmental stresses and especially the oxidative challenge. In order to identify regulators involved in the oxidative stress response of this commensal bacteria, several mutants affected in known or putative transcriptional regulators annotated in the E. faecalis genome (available at the T.I.G.R.) were constructed. A part of these genes encoded proteins belonging to a two-component regulatory system, whereas others were retained on the basis of homology with known oxidative stress transcriptional regulators such as oxyR or soxS from Escherichia coli or perR from Bacillus subtilis. Comparative proteomic analysis revealed that one mutant, affected in the ef2958 locus, encoding the most homologous regulator to OxyR, showed some modifications in the protein pattern only after a sublethal H ₂O ₂ treatment in comparison with the wild-type strain. Indeed, using two-dimensional electrophoresis, five spots significantly less expressed in the ef2958 mutant cultivated with 2 mmol L ^-1 H ₂O ₂ were detected. Taken together, these results allowed us to qualify Ef2958 as a new oxidative stress regulator in E. faecalis.

Résumé
Identification d'un nouveau régulateur transcriptionnel impliqué dans le stress oxydatif chez Enterococcus faecalis. Enterococcus faecalis, parfois utilisé comme ferment lactique, est capable de résister à de multiples stress environnementaux et plus particulièrement au stress oxydatif. Dans le but d'identifier des régulateurs de la réponse au stress oxydatif chez cette bactérie commensale, plusieurs mutants de régulateurs transcriptionnels annotés sur le génome d'E. faecalis (disponible sur le site du T.I.G.R.) ont été construits. Certains de ces gènes codent des protéines appartenant à des systèmes de régulation à deux composants, les autres ayant été définis par homologie de séquence avec des gènes codant des régulateurs transcriptionnels de stress oxydatif connus, tels que oxyR ou soxS chez Escherichia coli ou encore perR de Bacillus subtilis. Des analyses de protéomique comparative ont révélé que le mutant affecté sur le locus ef2958, qui montre la meilleure homologie avec le régulateur OxyR, présente des variations significatives de son profil protéique suite à un traitement subléthal en présence d'H ₂O ₂ comparativement avec celui de la souche sauvage. En effet, dans ces conditions, cinq spots voient leur synthèse diminuée chez le mutant ef2958. L'ensemble de ces résultats nous permettent de qualifier la protéine Ef2958 de nouveau régulateur de stress oxydatif chez E. faecalis.

Key words: Enterococcus faecalis / ef2958 / transcriptional regulator / oxidative stress

Mots clés : Enterococcus faecalis / ef2958 / régulateur transcriptionnel / stress oxydatif

Correspondence and reprints: Jean-Christophe Giard giard@ibba.unicaen.fr

© INRA, EDP Sciences 2004