Purification and characterization of an intracellular esterase from Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii ITG 14

Evangellia Kakariari; Marina D. Georgalaki; George Kalantzopoulos; Effie Tsakalidou

doi:doi:10.1051/lait:2000140

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Volume 80 / No 5 (September-October 2000)

Lait, 80 5 (2000) 491-501

Abstract

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Issue		Lait Volume 80, Number 5, September-October 2000


Page(s)		491 - 501
DOI		https://doi.org/10.1051/lait:2000140

\n This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it. ), CBLU, University of Leeds * revised and updated by: Marcus Hennecke, Ross Moore, Herb Swan * with significant contributions from: Jens Lippmann, Marek Rouchal, Martin Wilck and others --> DOI: 10.1051/lait:2000140

Lait 80 (2000) 491-501

Purification and characterization of an intracellular esterase from Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii ITG 14

Evangellia Kakariari - Marina D. Georgalaki - George Kalantzopoulos - Effie Tsakalidou

Laboratory of Dairy Research, Department of Food Science and Technology, Agricultural University of Athens, Iera Odos 75, 118 55 Athens, Greece

(Received 17 December 1999; accepted 3 May 2000)

Abstract:

An intracellular esterase from Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii ITG 14 was purified by anion exchange and gel filtration chromatography. The enzyme had a molecular weight of 47 400 g $\cdot$ mol^-1 as determined by gel filtration chromatography, with an optimum activity on $\alpha$ -naphthyl-acetate at pH 6.0 and at 65 $^\circ$ C, with $K_{\rm M}$ = 1.2 mmol $\cdot$ L^-1. The esterase hydrolyzed synthetic substrates of low molecular weight (C2-C4), and among triglycerides only triacetin. Sulfhydryl group reagents and metal chelators had limited or no effect on enzyme activity; highest inhibition was observed with phenylmethyl sulfonyl fluoride (PMSF).

Keywords: Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii / esterase / purification / characterization

Résumé:

Purification et caractérisation d'une estérase intracellulaire de Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii ITG 14. Une estérase intracellulaire extraite de Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii ITG 14 a été purifiée par chromatographie échangeuse d'anions et chromatographie d'exclusion de taille. L'enzyme avait une masse moléculaire de 47 400 g $\cdot$ mol^-1, comme déterminé par chromatographie d'exclusion de taille, et elle avait une activité maximale sur le substrat $\alpha$ -naphthyl-acétate à pH 6,0 et 65 $^\circ$ C, avec $K_{\rm M}$ = 1,2 mmol $\cdot$ L^-1. L'estérase dégradait des substrats synthétiques de faible poids moléculaire (C2-C4), et parmi les triglycérides seulement la triacétine. Des groupements sulfydryles et des chélateurs de métaux n'avaient aucun effet ou un effet limité sur l'activité enzymatique ; la plus forte inhibition a été observée lors de l'utilisation du PMSF.

Mots clé : Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii / estérase / purification / caractérisation

Correspondence and reprints: Effie Tsakalidou
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