Application d'une variante turbidimétrique du test Limulus à l'évaluation de la flore à Gram négatif du lait cru

Abstract - Application of a Limulus turbidimetric assay for the evaluation of the Gram-negative flora in raw milk
One hundred and forty raw milk samples were analysed in duplicate by the Limulus turbidimetric assay, using the following experimental conditions: dilution of the sample with endotoxin-free water (1 / 10 000) and heating the last dilution at 80 °C for 1 h. Using the spiral plater, enumeration was also carried out of the Gram-negative flora (GN) on nutrient agar supplemented with crystal violet (2 mg / l), after homogeneization with an Ultra-Turrax for 30 s at 20 000 rpm. Under these experimental conditions, the turbidimetric test determination limit was 29 000 CFU / mL for the Gram-negative flora. The repeatability standard deviation of the turbidimetric assay averaged 0.082 log EU / mL and varied with the endotoxin concentration. The residual standard deviation of the regression GN on Limulus (in log endotoxin units / mL) calculated over the determination limit was 0.626 log CFU / mL. The slope of the calibration line did not differ statistically from 1.000 at the 5% level. Finally, a model is proposed to estimate the determination limit of an experimental technique.

Résumé - Cent-quarante échantillons de lait cru de grand mélange ont été soumis d'une part, au test Limulus, selon la technique turbidimétrique, et d'autre part, au dénombrement de la flore à Gram négatif (GN) sur milieu Nutrient Agar additionné de 2 mg / l de cristal violet, après une agitation de 30 s à l'aide d'une turbine tournant à 20 000 t / min. La fraction de l'échantillon soumise au test turbidimétrique a été diluée au 10 000^e dans de l'eau exempte d'endotoxine, et la dernière dilution a été chauffée pendant 1 h à 80 °C. Le seuil de détermination de la technique turbidimétrique a été fixé, dans les conditions expérimentales de l'étude, à 29 000 UFC / mL de bactéries à Gram négatif. L'écart type de répétabilité du test turbidimétrique calculé au-dessus du seuil de détermination est en moyenne de 0,082 log EU / mL, mais varie en fonction de la concentration en endotoxine du lait. L'écart type résiduel des écarts à la régression GN sur Limulus (en log unités d'endotoxine / mL) calculée au-dessus du seuil de détermination est de 0,626 log UFC / mL. La pente de la droite de calibrage n'est pas statistiquement différente de 1,000 au seuil de 5%. Enfin, un modèle mathématique a été proposé pour le calcul du seuil de détermination d'une technique expérimentale.