Les caractères du système protéolytique de Penicillium caseicolum. II. Caractérisation dune protéase neutre

Abstract - The main component of the exocellular proteolytic system, which was produced by Penicillium caseicolum on a neutral medium, has been purified by means of tannin precipitations, plus Sephadex G 75 and G 100 gel-filtration. 33 p. 100 of the initial activity were recovered.
The enzyme molecular weight was about 20 000 daltons. The optimum pH of activity on casein was next to pH 6,0 and to 5,0 on hemoglobin. The optimum temperature of activity was near 50° C. Its activation energy reached 12 Kcal mole^-1. The enzyme heat stability was weak: at pH 6,0, after 40 mn at the temperature of 55° C, the activity was reduced to 10 p. 100 of its initial value. The hydrolysis of a casein substrate was much faster than those of hemoglobin or serum-albumin and only peptides were released.
EDTA and O-phenantroline had an inhibitor effect at 1 mM of concentration. The enzyme inhibition by EDTA was removed by cobalt and copper. DFP, reagents of the SH - groups, and l-fluoro-2,4 dinitro-benzene were not active.
Through these properties, the enzyme could be identified to an endopeptidase which belongs to the metalloprotease group. Its properties were about ones of the protease II of Penicillium roqueforti and of protease II of Aspergillus oryzae

Résumé - Le composant majeur du système protéolytique exocellulaire produit par Penicillium caseicolum en milieu neutre a été purifié par précipitation au tanin et filtration sur gels de Séphadex G 75 et G 100 ; le rendement en activité est de 33 p. 100.
Le poids moléculaire de l'enzyme et d'environ 20 000 daltons. Son pH optimal d'action est voisin de 6,0 sur la caséine, de 5,0 sur l'hémoglobine. La température optimale d'action est proche de 50° C et l'énergie apparente d'activation est de 12 Kcal mole^-1. La stabilité thermique de l'enzyme est faible : au pH de 6,0, après 40 mn à 55° C, l'activité est réduite à 10 p. 100 de sa valeur initiale. L'hydrolyse du substrat caséine est beaucoup plus rapide que celle de l'hémoglobine ou de la sérum albumine et il y a seulement libération de peptides.
L'EDTA et l'O-phénanthroline exercent un effet inhibiteur à la concentration de 1 mM. Le cobalt et le cuivre réactivent l'enzyme inhibée par l'EDTA. Le DFP, les réactifs des groupes SH et le 1-fluoro 2, 4-dinitrobenzène sont inactifs.
Par ses propriétés, l'enzyme s'identifie à une endopeptidase appartenant au groupe des métallo-protéases. Elle est proche de la protéase II de Penicillium roqueforti et de la protéase II de Aspergillus oryzae