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Issue
Lait
Volume 67, Number 1, 1987
Page(s) 77 - 95
DOI https://doi.org/10.1051/lait:198715
Lait 67 (1987) 77-95
DOI: 10.1051/lait:198715

Evaluation de la technique DEFT associée à un comptage visuel ou à un comptage par analyseur d'images pour la numération de la flore totale du lait cru

A. DASENa, Christine PITONa, R. GRAPPINa and Pascale GUERRYb

a  I.N.R.A., Station expérimentale laitière, B.P. n° 94, 39800 Poligny, France
b  Elève ingénieur, I.N.A., Paris-Grignon, France

Abstract - Assessment of the Direct Epifluorescent Filter Technique (DEFT) with a visual or an image analyser counting for the enumeration of the total flora in raw milk
The Direct Epifluorescent Filter Technique (DEFT) is a rapid method which associates the membrane filtration technique and the epifluorescent microscopy for counting micro-organisms in milk.
A series of 167 raw milk samples, ranging from 7.103 to 4.106 CFU / mL was analyzed in duplicate by the DEFT method and the reference standard plate count method (SPC). The coefficient of correlation between DEFT and SPC is 0.914 and the accuracy expressed by the residual standard deviation from the regression SPC on DEFT, is 0.245 CFU / mL in log10. The coefficient of variation of repeatability averages 14.8 % and is nearly constant at the various milk levels of contamination.
The analysis of 44 milk samples submitted either to the "standard" shaking or blended with an Ultra-Turrax during 30 sec. at 20 000 r.p.m. showed that the disruption of microbial clumps improved the accuracy of the DEFT. Moreover, the DEFT counts are affected more by the operator preparing the slides than by the reader; possible reasons and ways to overcome these discrepancies are discussed.
One hundred forty six slides were examined both visually and by the Image Analyzer 40-10 (Foss Electric). The coefficient of correlation between the two counting procedures is 0.984 and the residual standard deviation from the regression of the visual count over the semi-automated count is 0.109 bacteria / mL in log10. The average semi-automated DEFT count is higher than the visual DEFT count but this difference becomes proportionnaly less as the count increases. According to the level of contamination of the milk samples, we have calculated the minimum number of fields which have to be examined to fit an accuracy of 1.5 to 2 %.


Résumé - La technique DEFT (Direct Epifluorescent Filter Technique) est une méthode rapide de dénombrement des bactéries du lait cru qui utilise la filtration sur membrane et la microscopie en épifluorescence.
Cent soixante-sept échantillons de lait cru contenant entre 7.103 et 4.106 UFC / mL ont été analysés en double par la technique DEFT et la méthode de référence (norme FIL 100). Le coefficient de corrélation entre ces deux méthodes est de 0,914 et l'écart-type résiduel de la régression référence sur DEFT de 0,245 UFC / mL en log10. Le coefficient de variation de répétabilité de la technique DEFT est en moyenne de 14,8 %, quel que soit le niveau de contamination du lait.
L'analyse de 44 échantillons de lait cru, soit après une agitation standard, soit après une agitation par turbine, a montré que la désagrégation des amas microbiens améliore nettement la précision d'estimation de la technique DEFT. Par ailleurs, on a mis en évidence une influence plus grande de l'opérateur préparant les lames que du lecteur sur les résultats de la technique DEFT ; les raisons possibles et les moyens d'y remédier sont également discutés.
Cent quarante-six lames ont été comptées à la fois à l'oeil nu et par l'analyseur d'image 40-10 (Foss-Electric). Le coefficient de corrélation obtenu entre les deux comptages est de 0,984 et l'écart-type résiduel de la régression comptage visuel sur comptage par analyseur d'image de 0,109 bactérie / mL en log10. Les résultats du comptage par analyseur d'images sont en moyenne supérieurs à ceux du comptage visuel, cette différence diminuant avec le niveau de contamination des échantillons. Pour chaque classe de niveau de contamination du lait, nous avons calculé le nombre minimum de champs qui doivent être examinés par l'analyseur d'images pour obtenir une précision de 1,5 à 2 % en valeur logarithmique.


Key words: Raw milk / Microbial count / DEFT / Epifluorescent microscopy / Semi-automated counting / Image analyzer / Accuracy

Mots clés : Lait cru / Dénombrement microbien / DEFT / Microscopie épifluorescente / Comptage semi-automatique / Analyseur d'images / Précision