Purification and characterization of two porcine β-lactoglobulin variants by NaCl salting-out and reversed phase-HPLC

Abstract - Porcine whey proteins have been separated by reversed-phase HPLC and the different eluted fractions were analysed by SDS-PAGE. Two protein fractions lately eluted from HPLC, with an apparent molecular weight of approximately 18 800 had an amino acid composition corresponding to that of porcine β-lactoglobulin. These 2 fractions differed only in their Ala / Val content and consequently may be genetic variants of porcine β-lactoglobulin. In order to obtain larger amounts of β-lactoglobulin, we attempted to adapt to porcine whey a previously published method used for bovine β-lactoglobulin and based on NaCl salting-out at low pH. Each step of purification was monitored by RP-HPLC. After precipitation (14% NaCl), solubilisation in 7% NaCl and dialysis against distilled water, β-lactoglobulin was obtained with a purity of 94%. Final separation of β-lactoglobulin variants can be rapidly achieved by RP-HPLC on a semi-preparative column.

Résumé - Purification et caractérisation de deux variants de la p-lactoglobuline porcine par précipitation fractionnée par NaCl et CLHP en phase inverse
Les protéines du lactosérum de lait de truie ont été séparées par CLHP en phase inverse et les différentes fractions éluées ont été analysées par électrophorèse en présence de SDS. Les deux fractions les plus retenues sur la colonne, d'un poids moléculaire voisin de 18 800 et ayant une composition en acides aminés correspondant à celle de la β-lactoglobuline porcine, ne diffèrent que par leur teneur en alanine et en valine. Ces deux fractions peuvent correspondre à deux variants génétiques de la β-lactoglobuline porcine. Afin d'obtenir de plus grandes quantités de β-lactoglobuline, nous avons adapté un protocole de précipitation fractionnée par NaCl à pH acide (protocole déjà utilisé pour la β-lactoglobuline bovine). Chaque étape de purification a été analysée par CLHP en phase inverse. En trois étapes, précipitation dans NaCl 14%, redissolution à NaCl 7% et dialyse contre de l'eau distillée, nous avons obtenu de la β-lactoglobuline pure à 94%. La séparation des deux variants peut ensuite être rapidement effectuée par CLHP en phase inverse sur colonne semi-préparative.