Lait 86 (2006) 251-257
DOI: 10.1051/lait:2006005

Note

Rapid and cost-effective method for micro-organism enumeration based on miniaturization of the conventional plate-counting technique

Florence Baron, Marie-Françoise Cochet, Wilfried Ablain, Noël Grosset, Marie-Noël Madec, Fabienne Gonnet, Sophie Jan and Michel Gautier

UMR Science et Technologie du Lait et de l'oeuf, Équipe de Microbiologie, Agrocampus Rennes-Inra, 65 rue de Saint Brieuc, 35042 Rennes, France

(Received 9 September 2005 - Accepted 6 March 2006 - Published online 31 May 2006)

Abstract
The conventional plate-counting technique, while still routinely used in laboratories requiring micro-organism screening or enumeration, remains time-consuming and tiresome for the operator when large numbers of samples are assayed. We developed a miniaturized method based on serial tenfold dilution of samples in 96-well micro-plates followed by multiple pour-plating into 24-well micro-plates with an agar overlay procedure, providing easy colony counting and interpretation. The accuracy, sensitivity and reproducibility of this miniaturized method were tested using the conventional plate-counting technique as reference for viability measurements of Escherichia coli cells submitted to a sub-lethal thermic stress, enumeration of lactic bacteria during milk fermentation, and analysis of the total aerobic flora, coliform and Staphylococcus aureus content of spoiled food. No significant differences were found between the results obtained with our miniaturized method and the conventional one, regardless of the bacteria and media used. Providing a reduction in overall cost and handling time, this reliable miniaturized method should be useful for experiments involving large ranges of cell concentration as well as great numbers of samples and replicates.

Résumé
Développement d'une méthode de dénombrement microbien rapide et peu coûteuse basée sur la miniaturisation de la méthode classique de dénombrement après culture sur gélose. La méthode classique de dénombrement des micro-organismes après culture en milieu gélosé est toujours très utilisée dans les laboratoires de microbiologie. Elle est cependant coûteuse en temps et devient fastidieuse pour des études mettant en jeu un grand nombre d'échantillons et/ou nécessitant de nombreuses répétitions. Nous avons développé une méthode miniaturisée basée sur le même principe que la méthode classique mais utilisant des plaques 96 puits pour la phase de dilution décimale des échantillons et des plaques 24 puits pour la phase d'ensemencement des dilutions dans l'agar, ceci permettant le traitement d'un grand nombre d'échantillons en gardant la même facilité de comptage et d'interprétation des colonies. La fiabilité, la sensibilité et la reproductibilité de cette méthode miniaturisée ont été vérifiées en utilisant la technique conventionnelle comme référence pour des dénombrements de cellules d'Escherichia coli soumises à un traitement thermique subléthal, de bactéries lactiques au cours de la fermentation du lait en yaourt et de la flore mésophile, des coliformes totaux et de Staphylococcus aureus dans des aliments. Aucune différence significative n'a été mise en évidence entre les résultats obtenus par les deux méthodes, quels que soient les bactéries et le milieu de culture. Cette microméthode de dénombrement après culture en milieu gélosé permet donc des réductions de coût et de temps de manipulation avec la même fiabilité que la méthode classique. Elle peut donc être utile pour toutes les expériences impliquant une gamme étendue de concentrations bactériennes ainsi qu'un grand nombre d'échantillons et de répétitions.

Key words: micro-organism counting -- pour-plate enumeration -- miniaturized method

Mots clés : dénombrement microbien -- ensemencement dans la masse -- microméthode

Correspondence: Florence Baron baron@agrocampus-rennes.fr


© INRA, EDP Sciences 2006