Lait 72 (1992) 221-232
DOI: 10.1051/lait:1992216

Intérêt du dosage de l'activité cytochrome oxydase pour l'évaluation de la flore psychrotrophe du lait cru à l'arrivée à l'usine

D. Rongvaux-Gaïda^a and C. Piton-Malleret<sup>a, b

a</sup>  INRA, station de recherches en technologie et analyses laitières, BP 89, 39801 Poligny cedex, France
^b  Adresse actuelle : INRA, laboratoire de recherches sur la viande, CRJ, 78352 Jouy-en-Josas Cedex, France

(Reçu le 7 mars 1991 ; accepté le 6 décembre 1991)

Abstract - Use of the cytochrome oxidase test for the evaluation of psychrotrophic flora in raw milk at the dairy plant
One hundred and twenty milk-tanker road samples were collected from 4 French dairy plants to evaluate the analytical performances of the cytochrome oxidase activity as-say used to assess the bacteriological quality of raw milk. The samples were submitted to shaking in an Ultra-turrax for 30 s and then to enumeration of the psychrotrophic flora using the Spiral method. The cytochrome oxidase activity was also determined, in duplicate, after preincubation of the samples: 7 h at 30 °C or 48 h at 4 °C or 48 h à 4 °C followed by an additional incubation of 7 h at 30 °C. The TMPD (NNN'N'-tetramethyl-p-phenylene-diamine dihydrochloride) oxidation by cytochrome oxidase gave a blue coloration; its intensity was determined by 2 methods: visually by comparison with a scale, or with a colorimeter. Both color intensity measures were very well correlated (r = 0.98) andthe repeatability geométric relative standard deviations (in % CFU / mL) were lower than 10% for both the visual and colorimeter readings. For samples analysed after a 7-h preincubation at 30 °C, no correlation was found between color intensity and the level of the initial psychrotrophic flora (in log CFU / mL). After a 48-h preincubation at 4 °C, a linear relationship appeared for ail the bacterial concentration range of samples analysed (between 10³ and 10⁸ CFU / mL); the residual standard deviation of the regression was 0.524 log CFU / mL for the visual reading and 0.534 log CFU / mL for the colorimeter reading. An additional incubation of 7 h at 30 °C did not improve the accuracy of the method: the residual standard deviation of the regression was then 0.523 log CFU / mL for visual reading.

Résumé - Cent vingt échantillons de lait cru ont été prélevés dans les citernes de ramassage de 4 grandes entreprises laitières, dès leur arrivée au quai. Après agitation pendant 30 s à l'aide d'un Ultraturrax, les échantillons ont été soumis au dénombrement de la flore psychrotrophe à l'aide du système "Spiral". L'activité enzymatique de la cytochrome oxydase a été déterminée en double après une incubation préliminaire des échantillons : 7 h à 30 °C ou 48 h à 4 °C ou 48 h à 4 °C suivies d'une incubation supplémentaire de 7 h à 30 °C. L'oxydation du TMPD (NNN'N' tétraméthyl-p-phénylène diamine dihydrochloride) par la cytochrome oxydase se traduit par l'apparition d'une coloration bleu-violette, dont l'intensité a été évaluée, soit visuellement par comparaison à une gamme étalon, soit à l'aide d'un chromamètre. Les intensités de coloration mesurées par les 2 modes de lecture sont très corrélées (r = 0,98). Les écarts types relatifs géométriques de répétabilité (en % UFC / mL) sont dans tous les cas inférieurs à 10% pour la lecture visuelle et la mesure colorimétrique. Pour les échantillons de lait analysés après une préincubation de 7 h à 30 °C, il n'existe pas de corrélation satisfaisante entre l'intensité de coloration et le niveau de la flore psychrotrophe initiale. Cependant, après 48 h d'incubation à 4 °C, il apparaît une relation linéaire sur toute la gamme de concentration des échantillons analysés (entre 10³ et 10⁸ UFC / mL); l'écart type résiduel de la régression est de 0,524 log UFC / mL dans le cas d'une lecture visuelle, contre 0,534 log UFC / mL dans le cas d'une lecture au colorimètre. Une incubation supplémentaire de 7 h à 30 °C n'améliore pas la précision d'estimation du dosage : l'écart type résiduel est alors de 0,523 log UFC / mL dans le cas d'une lecture visuelle.

Key words: cytochrome oxidase / enzymatic activity / visual reading / colorimetric reading / raw milk / psychrotrophic flora / repeatability / accuracy

Mots clés : cytochrome oxydase / activité enzymatique / lecture visuelle / lecture colorimétrique / lait cru / flore psychrotrophe / répétabilité / justesse