Lait 70 (1990) 191-203
DOI: 10.1051/lait:1990316

Purification of bovine milk alkaline proteinase and comparison with purified bovine blood plasminogen or plasmin

G. Humbert^a, A. Berbar^a, G. Godbillon^b, J.Y. Le Deaut^a and G. Linden<sup>a

a</sup>  Laboratoire de Biochimie Appliquée (associé à l'INRA)
^b  Université de Nancy I, Faculté des Sciences, Laboratoire de Biologie Animale, BP 239, 54506 Vandoeuvre-lès-Nancy, Cedex, France

(Received 29 January 1990; accepted 16 February 1990)

Abstract - The bovine blood plasminogen (Plg) has been purified by affinity chromatography on Lysine-Sepharose. An electrophoresis pattern revealed sortie minor contaminant bands. The possibilities of contamination and activation of Plg have been examined; the likely causes of the heterogeneousness are:
an in vivo activation just before or during slaughter of the animals;
a partial activation during purification;
a self-activation or a self-hydrolyse which is a characteristic of proteinases or
a contamination of the chromatography column.
The milk alkaline proteinase was purified by affinity chromatographies on Lysine-Sepharose and an immunoadsorbant (rabbit anti-bovine plasminogen serum) from whole casein and on enzyme-enriched fraction. The purified fractions were partially heterogeneous and presented sortie minor components which are plasmin-chains. This sustains the assumption that self-activation or activation caused by traces of a whey activator in the whole casein occur. Blood and milk purified fractions were compared (electrophoresis, double-immunodiffusion, glycoprotein staining). This paper presents a novel method to purify the milk alkaline proteinase and to confirm the similarities between blood- and milk proteinase.

Résumé - Purification de la protéase alcaline du lait et comparaison avec la plasmine ou le plasminogène sanguins bovins purifiés
Le plasminogène du sang bovin a été purifié par chromatographie d'affinité sur Lysine-Sepharose. Il présente une bande majeure et des bandes mineures en électrophorèse et un arc contaminant en double immunodiffusion. Les possibilités de contamination ou d'activation du plasminogène sont examinées; ces causes d'hétérogénéité seraient:
une activation in vivo au moment du prélèvement du sang, une activation partielle pendant la purification, une autoactivation ou autolyse caractéristique des protéases, ou
une contamination du support chromatographique.
La chromatographie d'affinité sur Lysine-Sepharose et la chromatographie d'affinité sur imrnunoadsorbant (antisérum antiplasminogène bovin obtenu chez le lapin) ont été utilisées pour purifier la protéase alcaline du lait à partir de la caséine entière et d'une fraction protéique enrichie en enzyme. Les préparations sont hétérogènes en électrophorèse. En milieu dissociant, l'électrophorèse révèle des bandes mineures correspondant aux chaînes lourde et légère de la plasmine. Comme dans le cas du plasminogène sanguin il est permis de penser à une autoactivation, ou à une activation provoquée par des traces d'un activateur lactosérique dans la caséine. Les préparations contiennent donc du plasminogène et de la plasmine du lait ou apparue pendant le cycle de purification. Les enzymes du lait et du sang sont comparées par électrophorèses en gel de polyacrylamide et par immunodiffusion radiale. La protéase alcaline est, comme le plasminogène, une glycoprotéine. Ce travail présente donc une nouvelle voie de purification de la protéase alcaline du lait et montre de nouveau qu'elle est l'enzyme du sang.

Key words: milk alkaline proteinase / blood plasminogen or plasmin / purification / affinity chromatography / immunological reaction

Mots clés : protéase alcaline du lait bovin / plasminogène ou plasmine du sang / chromatographie d'affinité / électrophorèse / immunochimie