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Issue
Lait
Volume 68, Number 3, 1988
Page(s) 311 - 322
DOI https://doi.org/10.1051/lait:1988320
Lait 68 (1988) 311-322
DOI: 10.1051/lait:1988320

Nature des colonies se développant à la surface du milieu Violet Rouge Bile Lactose Agar (VRB) ensemencé avec du lait cru. Validité des dénombrements des colonies lactose-positives et des colonies lactose-négatives se développant sur ce milieu

J. RICHARDa, C. PITONb and J.J. GRATADOUXa

a  INRA, Laboratoire de Microbiologie laitière, 78350 Jouy-en-Josas, France
b  INRA, Station expérimentale laitière, 39800 Poligny, France

Abstract - Nature of the colonies growing on the surface of Violet Red Bile Agar inoculated with raw milk. Reliability and signification of the counting of lactose-negative and lactose-positive colonies present on this medium
About 140 samples of raw milk, ranging from 104 to up to 107 cfu / mL were submitted to a vigorous shacking for 30 s using a blender rotating at 20,000 rpm to break the bacterial clumps. They were then surface plated on VRB without a second layer of medium. After 24 h of incubation at 30 °C and one day at room temperature, 8 lactose-positive and 8 lactose-negative colonies were picked at random from each plate and characterized using the following tests: morphology and motility, Gram reaction (KOH method), detection of a cytochrome-oxidase c, metabolism of glucose and growth at 2 °C. In addition, the lactose-positive strains were tested for nitrate reduction.
More than 95 % of the lactose-positive isolates were classified as enterobacteria, the remaining belonging to the genus Aeromonas.
The majority of the lactose-negative bacteria were identified as psychrotrophic Pseudomonas. However, in samples containing less than 103 lactose-negative bacteria / mL the genus Acinetobacter was predominant, followed by the genus Alcaligenes. On the other hand, lactose-negative enterobacteria predominated in some samples containing more than 106 lactose-negative bacteria / mL.
Nutrient agar and VRB agar gave similar results in the enumeration of psychrotrophic Pseudomonas, and these bacteria were not affected by the growth of coliform bacteria on VRB and vice versa.
It is concluded that coliforms bacteria (lactose-positive colonies) and lactose-negative bacteria could be enumerated on VRB inoculated on surface with raw milk. When these lactose-negative bacteria are in the range of 103-106 ufc / mL, they probably belong to the psychrotroph group of Pseudomonas.


Résumé - Environ 140 échantillons de lait cru contenant entre 104 et plus de 107 ucf par mL ont été ensemencés à la surface du milieu Violet Rouge Bile Lactose Agar (VRB. Difco). Après 24 h d'incubation à 30 °C puis autant à température ambiante. 8 colonies lactose-positives et 8 colonies lactose-négatives ont été prélevées sur chaque boîte de Petri et soumises à différents tests rapides d'identification.
Dans environ 95 % des cas, la flore lacto-positive a pu être identifiée à des entérobactéries. Les autres souches de ce groupe appartenaient au genre Aeromonas. Les Pseudomonas du groupe fluorescent dominaient très nettement la flore lactose-négative dans la majorité des échantillons de lait, sauf dans ceux contenant moins de 103 bactéries lactose-négatives où c'était le genre Acinetobacter qui l'emportait, et ceux qui en contenaient plus de 106, où des entérobactéries devenaient de plus en plus fréquentes.
Il n'y avait pas de différence significative, pour le dénombrement des Pseudomonas psychrotrophes du lait cru, entre le milieu VRB et un milieu non sélectif, et la croissance de ces bactéries n'était pas affectée par le développement, sur le milieu VRB, de bactéries coliformes isolées du lait cru. Réciproquement, ces dernières se développaient normalement sur ce milieu en présence de ces Pseudomonas, quel qu'en soit le niveau. Par conséquent, l'ensemencement du lait cru à la surface du milieu VRB peut permettre la numération simultanée des bactéries coliformes (colonies lactose-positives) et des colonies lactose-négatives. Dans la limite où ces dernières sont comprises entre 103 et 106 par mL, il s'agit essentiellement de Pseudomonas psychrotrophes.


Key words: Raw milk / Enterobacteria / Alcaligenes / Acinetobacter / Aeromonas / Identification / Enumeration / Medium.

Mots clés : Lait cru / Bactéries coliformes / Alcaligenes / Acinetobacter / Aeromonas -Pseudomonas / Identification / Numération / Milieu de culture