Dénombrement des spores de Clostridium tyrobutyricum par filtration sur membrane et culture sur milieu gélosé

Abstract - Enumeration of Clostridium Tyrobutyricum spores by membrane filtration and culture on gelose media
This work is a part of a comprehensive research program whose purpose is to replace the current technique for counting spores of C. tyrobutyricum in milk by another method, meeting better the industry requirements for sensivity and rapidity.
An original filtration process, published elsewhere, permits to collect, on a 47 mm diameter filter, spores contained in 100 to 400 ml of milk and thus to obtain a sufficient sensivity.
The improvement of rapidity of detection has been obtained by utilization of a less selective base medium, the RCM.
This medium has then been rendered partially selective by addition of cyscloserine which inhibits Bacilli and differential by addition of acid fuchsin which allows to recognize and number specifically C. tyrobutyricum colonies, after incubation of the membrane filter on RCM medium anaerobically.
This method has been tested successfully with artificially contaminated milks. Nevertheless its actual application in good conditions requires further work

Résumé - Ce travail s'insère dans un ensemble de recherches dont le but est de substituer, à la technique actuelle de dénombrement des spores de C. tyrobutyricum dans le lait, une méthode répondant mieux aux exigences de sensibilité et de rapidité.
Un procédé de filtration original, publié par ailleurs, permet de concentrer sur une membrane de 47 mm de diamètre les spores contenues dans 100 à 400 ml de lait, et donc d'obtenir une sensibilité suffisante.
L'amélioration de la rapidité de détection a été obtenue par utilisation d'un milieu de base peu sélectif, le RCM.
Ce milieu a été ensuite rendu partiellement sélectif par addition de cyclosérine qui inhibe les Bacillus et différentiel par addition de fuchsine acide ; l'incubation sur ce milieu en anaérobiose de la membrane filtrante permet de reconnaître et de dénombrer spécifiquement les colonies de C. tyrobutyricum.
La méthode a été testée avec succès sur des laits contaminés artificiellement. Toutefois son application effective dans de bonnes conditions nécessite divers travaux complémentaires