Les caractères du système lipolytique de l'espèce Penicillium caseicolum. Purification et propriétes de la lipase majeure

Abstract - A Penicillium caseicolum lipase isolated from culture medium, which probably represents the main exocellular lipolytic activity of the mould, has been purified by means of ammonium sulfate precipitation, gel-filtration on Sephadex G 75 and DEAE Sephadex A 50 chromatography, with about 48 p. 100 yield. The specific activity of the preparation on tributyrine as substrate at pH 8 is about 6,600 lipase units. The molecular weight is 24,000 ± 1,000 daltons.
The purified enzyme is more stable than the crude preparation; the former shows a higher stability at pH 6 and 10. The lipase has an optimal pH around 9 - 9,6 and an optimal temperature at 35° C ; its activation energy is 3.4 Kcal / mole^-1. It is stable for 15 mn below 35° C and the inactivation occurs in two stages at 40° C and at pH 8.5 : the loss of activity is 60 p. 100 after 5 mn and 90 p. 100 after 60 mn.
The relative activities on tributyrine, butter-oil and trioleine are 100, 87 and 22 respectively and the enzyme is also active at a non-negligible rate on triacetine in solution. The presence of Ca⁺⁺ ions is required to attein maximum rate and the inhibition by specific reagents of - OH and - SH groups reaches only 50 to 63 p. 100 at the concentration of 10 mM

Résumé - Une lipase de Penicillium caseicolum isolée du milieu de culture et représentant apparemment l'essentiel de l'activité lipolytique de la moisissure, a été purifiée avec un rendement en activité de 48 p. 100. L'activité spécifique de la préparation, estimée sur tributyrine à pH 8, est d'environ 6 600 unités lipase. Le poids moléculaire de la protéine est 24 000 daltons.
Par rapport aux préparations brutes, l'enzyme purifiée manifeste une plus grande stabilité vis-à-vis de la température et du pH notamment dans la zone alcaline ; son pH optimal d'action est 9 - 9,6, sa température optimale de 35° C. L'énergie d'activation, entre 0° C et 30° C est 3,4 Kcal / mole. L'inactivation thermique de l'enzyme en fonction du temps s'effectue en deux étapes : à 40° C, pH 8,5, la perte d'activité atteint 60 p. 100 après 5 mn et 90 p. 100 après 1 h.
La lipase hydrolyse la tributyrine, l'huile de beurre et la trioléine, mais également la triacétine en solution à une vitesse non négligeable.
L'enzyme nécessite la présence d'ion calcium pour manifester son activité maximale ; elle n'est pas totalement inhibée par les réactifs spécifiques des groupes -OH et -SH, à la concentration 10 mM