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Issue
Lait
Volume 56, Number 559-560, 1976
Page(s) 622 - 644
DOI https://doi.org/10.1051/lait:1976559-56033
Lait 56 (1976) 622-644
DOI: 10.1051/lait:1976559-56033

Les caractères du système lipolytique de l'espèce Penicillium caseicolum. Purification et propriétes de la lipase majeure

G. LAMBERET and J. LENOIR

Laboratoire de Recherche de la Chaire de Technologie (I.N.R.A.), Institut National Agronomique Paris-Grignon, 78850 Thiverval-Grignon

Reçu pour publication en juin 1976.

Abstract - A Penicillium caseicolum lipase isolated from culture medium, which probably represents the main exocellular lipolytic activity of the mould, has been purified by means of ammonium sulfate precipitation, gel-filtration on Sephadex G 75 and DEAE Sephadex A 50 chromatography, with about 48 p. 100 yield. The specific activity of the preparation on tributyrine as substrate at pH 8 is about 6,600 lipase units. The molecular weight is 24,000 ± 1,000 daltons.
The purified enzyme is more stable than the crude preparation; the former shows a higher stability at pH 6 and 10. The lipase has an optimal pH around 9 - 9,6 and an optimal temperature at 35° C ; its activation energy is 3.4 Kcal / mole-1. It is stable for 15 mn below 35° C and the inactivation occurs in two stages at 40° C and at pH 8.5 : the loss of activity is 60 p. 100 after 5 mn and 90 p. 100 after 60 mn.
The relative activities on tributyrine, butter-oil and trioleine are 100, 87 and 22 respectively and the enzyme is also active at a non-negligible rate on triacetine in solution. The presence of Ca++ ions is required to attein maximum rate and the inhibition by specific reagents of - OH and - SH groups reaches only 50 to 63 p. 100 at the concentration of 10 mM


Résumé - Une lipase de Penicillium caseicolum isolée du milieu de culture et représentant apparemment l'essentiel de l'activité lipolytique de la moisissure, a été purifiée avec un rendement en activité de 48 p. 100. L'activité spécifique de la préparation, estimée sur tributyrine à pH 8, est d'environ 6 600 unités lipase. Le poids moléculaire de la protéine est 24 000 daltons.
Par rapport aux préparations brutes, l'enzyme purifiée manifeste une plus grande stabilité vis-à-vis de la température et du pH notamment dans la zone alcaline ; son pH optimal d'action est 9 - 9,6, sa température optimale de 35° C. L'énergie d'activation, entre 0° C et 30° C est 3,4 Kcal / mole. L'inactivation thermique de l'enzyme en fonction du temps s'effectue en deux étapes : à 40° C, pH 8,5, la perte d'activité atteint 60 p. 100 après 5 mn et 90 p. 100 après 1 h.
La lipase hydrolyse la tributyrine, l'huile de beurre et la trioléine, mais également la triacétine en solution à une vitesse non négligeable.
L'enzyme nécessite la présence d'ion calcium pour manifester son activité maximale ; elle n'est pas totalement inhibée par les réactifs spécifiques des groupes -OH et -SH, à la concentration 10 mM



©  1976