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Issue
Lait
Volume 57, Number 569-570, 1977
Page(s) 601 - 618
DOI http://dx.doi.org/10.1051/lait:1977569-57026
Lait 57 (1977) 601-618
DOI: 10.1051/lait:1977569-57026

Étude des caillettes des bovins à l'état ruminant pour l'obtention d'extraits coagulants à base de pepsine bovine. I. Méthodes d'extraction

E. VALLES and J. P. FURET

Laboratoire de Recherches sur les Protéines, C.N.R.Z., I.N.R.A. 78350 Jouy-en-Josas (France)

(Reçu pour publication en juin 1977.)

Abstract - A procedure of extraction and concentration of bovine pepsin has been devised for a further study of individual adult bovine vells as a function of different factors (age, breed, feeding). To PU (g) of minced vells 1.25 PU (ml) of 0.2 M HCl is added. The mixture is incubated at 42° C for 45-60 mn and subsequently clarified by adding 1 M aluminum sulfate and 1 M disodium phosphate. From one single extraction this technique produces the same yield of active pepsin as 3 consecutive extractions with water at 20° C. Clarified extracts are concentrated by precipitating pepsin with NaCl at pH 1.0. The precipitate is separated by centrifugation and dissolved in water. This concentration procedure requires less than 2 hrs and produces only small losses of activity (ca. 7 p. 100). The concentrated extracts were adjusted at pH 5.3. They were kept in the presence of thymol for 90 days at 5° C, 20° C and 30° C without any loss of clotting activity. The different steps of the technique have been studied in details.


Résumé - Dans l'optique d'une étude détaillée de caillettes individuelles de bovins adultes, une méthode d'extraction et de concentration de la pepsine bovine a été mise au point.
A PU (g) de caillettes broyées, 1,25 PU (ml) de HCl 0,2 M sont ajoutés. Le mélange est incubé à 42° C pendant 45 mn à 60 mn. Les macérations sont clarifiées par addition de sulfate d'aluminium 1 M et de phosphate disodique 1 M. Des rendements d'extraction élevés permettent d'obtenir à l'aide d'une seule macération autant de pepsine que trois macérations consécutives effectuées dans l'eau à 20° C.
La concentration des macérations clarifiées est obtenue par précipitation à pH 1,0 par NaCl. Le précipité est dissous dans l'eau après séparation par centrifugation. Moins de 2 h sont nécessaires pour réaliser cette opération qui n'entraîne que de faibles pertes d'activité coagulante (de l'ordre de 7 p. 100).
Les extraits concentrés de pepsine bovine ajustés à pH 5,3 et additionnés de thymol ont été conservés pendant 90 j à 5° C, 20° C et 30° C sans perte de leur activité coagulante.
Les rendements d'extraction, les activités coagulantes des macérations et des extraits concentrés ont été étudiés